在細(xì)胞培養(yǎng)體系中,血清是唯一不屬于人工合成的成分,同時(shí)也讓血清成分成為細(xì)胞培養(yǎng)體系中最大的不確定因素,因此如何選擇合適的血清是細(xì)胞培養(yǎng)得好壞的決定性因素之一。根據(jù)采血時(shí)機(jī)的不同,牛血清可分為胎牛血清(Fetal Bovine Serum,F(xiàn)BS)、新生牛血清和小牛血清,我們細(xì)胞培養(yǎng)中一般使用的是胎牛血清,也是最為(干凈),營(yíng)養(yǎng)最為豐富的血清。
胎牛血清是在母牛懷孕3-8個(gè)月時(shí),通過胎牛心臟穿刺采血獲得新鮮的胎牛全血,經(jīng)自然層析、離心后收集得到去除血細(xì)胞、纖維蛋白等成分的淡黃色透明上清液體,并在生產(chǎn)過程使用多級(jí)高置流膜過濾技術(shù)和三級(jí)0.1µm終端微濾方法處理而獲取的血清。相比于新生牛和小牛血清,胎牛血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有傷害的成分最少,因此對(duì)于一些較“脆弱”的細(xì)胞如干細(xì)胞、原代細(xì)胞,一定要使用優(yōu)質(zhì)的胎牛血清進(jìn)行培養(yǎng)。
MDBio公司旗下在美國(guó)創(chuàng)建品牌ACTGene胎牛血清,每一批原材料都經(jīng)過嚴(yán)格篩選,所有產(chǎn)品均在經(jīng)歐洲藥品質(zhì)量管理局(EDQM)認(rèn)證的GMP車間生產(chǎn),其生產(chǎn)采用三步濾菌處理法,最后的過濾步驟為連續(xù)通過三個(gè)100nm的過濾膜,并經(jīng)過嚴(yán)格的病原性病毒檢測(cè),無病原性病毒(BVDV,IBRV,BPIV3);
胎牛血清要求:
1、性狀、外觀:淺黃色澄清、無溶血、無異物稍粘稠液體。
2、蛋白質(zhì)含量:3.5%~5.0%( w/v)
3、血紅蛋白含量:≤ 0.02%( w/v)
4、無菌檢驗(yàn):陰性
5、支原體檢驗(yàn):陰性
6、細(xì)菌內(nèi)毒素:≤5(EU/ml)
7、牛腹瀉病毒:陰性
8、大腸桿菌噬菌體:陰性
9、支持細(xì)胞增殖:(Sp2/0-Ag14) 生長(zhǎng)曲線 (接種濃度)最大增殖濃度 ≥2.5×106個(gè)/ml,細(xì)胞倍增時(shí)間:≤15h,克隆率:≥85%
1、提供對(duì)維持細(xì)胞指數(shù)生長(zhǎng)的激素,基礎(chǔ)培養(yǎng)基中沒有或量很少的營(yíng)養(yǎng)物,以及主要的低分子營(yíng)養(yǎng)物;
2、提供結(jié)合蛋白,能識(shí)別維生素、脂類、金屬和其他激素等,能結(jié)合或調(diào)變它們所結(jié)合的物質(zhì)活力;
3、有些情況下結(jié)合蛋白質(zhì)能與有毒金屬和熱原質(zhì)結(jié)合,起到解毒作用;
4、是細(xì)胞貼壁、鋪展在塑料培養(yǎng)基質(zhì)上所需因子來源;
5、起酸堿度緩沖液作用。 6、提供蛋白酶抑制劑,使在細(xì)胞傳代時(shí)使剩余胰蛋白酶失活,保護(hù)細(xì)胞不受傷害;
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