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環(huán)己胺丙磺酸CAPS是一種常用的生化原料，可以用作助焊劑、干燥劑、涂料中水性異氰酸酯的固化劑，

在生化行業(yè)，通常作為生物緩沖劑。

根據(jù)其純度和雜質(zhì)含量的不同，應(yīng)用的行業(yè)也不相同。

從分子結(jié)構(gòu)上看，CAPS是一種環(huán)己烷N-取代的氨基磺酸，分子量221.32，具有兩性，是一種非常好的

生物緩沖劑，pH緩沖范圍9.7-11.1，通常被用作WB實(shí)驗(yàn)蛋白質(zhì)PVDF轉(zhuǎn)膜或硝酸纖維素NC轉(zhuǎn)膜的緩沖液。

【CAS#】 1135-40-6

【分子量】221.32

【分子式】C9H19NO3S

【存儲(chǔ)條件】室溫，避光防潮

 

• Good’s緩沖液

      ②對(duì)測(cè)定蛋白質(zhì)含量的雙縮脲法和Lowry法不適用，因?yàn)樗鼈儠?huì)使空白管的顏色加深。

 

 

Western Blot 蛋白質(zhì)免疫印記實(shí)驗(yàn)，原理是通過(guò)特異性抗體對(duì)凝膠電泳處理過(guò)的細(xì)胞或生物樣品進(jìn)行著色，

通過(guò)分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。

 

實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)如下：

1.SDS-PAGE電泳：與核酸雜交方法類(lèi)似，只不過(guò)被檢測(cè)的是蛋白質(zhì)，探針是抗體，顯色用標(biāo)記的二抗。

一般來(lái)說(shuō)低分子量蛋白用Tri-Glycerine或者Tris-Tricine緩沖體系，高分子量蛋白則用CAPS緩沖系統(tǒng)更好。

緩沖液中的甘氨酸會(huì)影響測(cè)序，所以現(xiàn)在測(cè)序用的轉(zhuǎn)膜緩沖液是10mM/1CAPS10%甲醇。

CAPS電印記緩沖液中的甲醇濃度范圍是0~20%，一般甲醇濃度高的緩沖液對(duì)低分子量蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移效果好，

而甲醇濃度低甚至不含甲醇的緩沖液則有利于高分子量蛋白的轉(zhuǎn)移。

2.PVDF膜處理時(shí)先放入甲醇浸泡幾秒鐘，再放入CAPS電印記緩沖液，后續(xù)操作須防止膜干涸，如果PVDF膜

變干，需要重復(fù)前面步驟。電泳凝膠也需要在CAPS緩沖液中浸泡5-10分鐘，有些強(qiáng)堿性蛋白可不用此步驟。

3.轉(zhuǎn)印條件通常是50V恒壓、100-170mA電流強(qiáng)度，室溫下進(jìn)行電印記轉(zhuǎn)移，凝膠和PVDF膜之間的氣泡務(wù)必

除盡，分子量較高的蛋白注意延長(zhǎng)轉(zhuǎn)移時(shí)間。

 

4.PVDF膜染色前需取出用去離子水稍微漂洗，用甲醇浸泡，然后用0.1%考馬斯亮藍(lán)染色30-50秒，50%甲醇

脫色，去離子水洗滌并晾干即可。

 

 

現(xiàn)在蛋白質(zhì)的PVD轉(zhuǎn)膜已經(jīng)不用Tris-gly、SDS、20%甲醇緩沖液，因?yàn)榫彌_液中有甘氨酸，

所以測(cè)序的時(shí)候很難區(qū)分甘氨酸是Buffer帶進(jìn)去還是蛋白質(zhì)本身的，現(xiàn)在測(cè)序用的轉(zhuǎn)膜緩沖液是10mM/1CAPS10%甲醇，

CAPS電印記緩沖液中的甲醇濃度范圍是0~20%，一般甲醇濃度高的緩沖液對(duì)低分子量蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)移效果好，

而甲醇濃度低甚至不含甲醇的緩沖液則有利于高分子量蛋白的轉(zhuǎn)移。