一、實(shí)驗(yàn)介紹
常規(guī)轉(zhuǎn)染技術(shù)可分為兩大類,一類是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染,一類是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(永久性轉(zhuǎn)染),前者外源DNARNA不整合到宿主染色體中,雖然可以達(dá)到高水平表達(dá),但通常只能維持幾天,在轉(zhuǎn)染後的24-72小時(shí)內(nèi)分析結(jié)果,後者外源質(zhì)粒DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上,使宿主細(xì)胞可長(zhǎng)期表達(dá)目的基因及蛋白,需要在瞬時(shí)轉(zhuǎn)染基礎(chǔ)上對(duì)靶細(xì)胞性行篩選,篩選得到的細(xì)胞可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白,用於蛋白的擴(kuò)增及富集,或得到穩(wěn)定沉默特定基因的細(xì)胞株
二、實(shí)驗(yàn)週期
5-7 工作日(瞬時(shí)轉(zhuǎn)染) 50-60 工作日(穩(wěn)定轉(zhuǎn)染)
三、交付標(biāo)準(zhǔn)
細(xì)胞、實(shí)驗(yàn)結(jié)果報(bào)告(材料、方法、數(shù)據(jù)分析、實(shí)驗(yàn)結(jié)果)
四、客戶提供
瞬時(shí)轉(zhuǎn)染客戶提供:待轉(zhuǎn)染細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)相關(guān)信息、待轉(zhuǎn)染的質(zhì)粒、目的基因信息、目的蛋白抗體
常規(guī)細(xì)胞或特殊細(xì)胞穩(wěn)定轉(zhuǎn)染(質(zhì)粒轉(zhuǎn)染)客戶提供:待轉(zhuǎn)染細(xì)胞株、待轉(zhuǎn)染質(zhì)粒(包括質(zhì)粒測(cè)序結(jié)果)、目的基因信息、目的蛋白抗體
五、實(shí)驗(yàn)流程
順時(shí)轉(zhuǎn)染:調(diào)整細(xì)胞狀態(tài) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 24、48、72hr檢測(cè)目的基因的表達(dá)
穩(wěn)定轉(zhuǎn)染:調(diào)整細(xì)胞狀態(tài) 細(xì)胞轉(zhuǎn)染 抗生素篩選 混合穩(wěn)轉(zhuǎn)株獲得 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株鑑定
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